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高效液相色譜法分析頭孢硫脒
高效液相色譜法分析頭孢硫脒
本品為(6R,7R)-3[(乙?;┘谆鵠-7-[α-(N,N’-二異丙基脒螺旋進料器硫基)-乙酰胺基]8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸內(nèi)銨鹽。按無水物計算,含C19H28N4O6S2不得少于94.0%。
【性狀】 本品礦用皮帶機為白色或類白色結晶性粉末;幾乎無臭,有引濕性。
本品在水中極易溶解,在乙醇制砂機設備中微溶,在丙酮、氯仿或乙醚中不溶。
比旋度 取本品,精密稱定,加水溶解振動電機并制成每1ml中含10mg的溶液,依法測定(中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ E),比旋度為135°~ 145°。
【鑒別】 (1)在含量測定項下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保留時間應與頭孢硫脒對照品主峰的保留時間一致。斜槽輸送機
(2)取本品適量,加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液,作為供試品溶液;另取頭孢硫脒對照品適量,加水溶解并制成每1ml中約含20mg的溶液,作為對照品溶液;取對照品溶液和供試品溶液等量混合,作為混合溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VB)試驗,吸取上述三種溶液各1μl,分別點于同一硅膠移動帶式輸送機G薄層板[取硅膠G2.5g,加含1%羧甲基纖維素鈉的磷酸鹽緩沖液(pH5.8)適量,調(diào)漿制板,經(jīng)105℃活化1小時,放入干燥器中備用]上,以新鮮配制的甲醇-異丙醇-磷酸鹽緩沖液(pH5.8)(7:2:1)為展開劑,展開后,晾干,于100℃加熱30分鐘,置碘蒸氣中顯色檢視。供試品溶液所顯主斑點的顏色與位置應與對照品溶液的主斑點相同,混合溶液應顯一個斑點。
(3)本品的紅外光吸收圖譜應與對照品的圖譜一致 (中國藥典螺旋輸送器2000年版二部附錄Ⅳ C)。
以上(1)電磁振動篩機、(2)兩項可選做一項。
重型板式給料機【檢查】 結晶性 取本品少許,依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄Ⅸ D),應符合規(guī)定。
酸度 取本品,加水制成每1 ml中含0.1g的溶液,依法測定(中國藥典2000年版二部附錄Ⅵ H給料機),pH值應為4.0~6.0。
溶液的澄清度與顏色取本品5份,各0.6g分別加水5ml溶解后,溶液應澄清無色;如顯渾濁,與1號濁度標準液(中國藥典2000年版二部附錄ⅨB)比較,均不得更濃;如顯色,與黃色或黃綠色6號標準比色液(中國藥典2000年版二部附錄Ⅸ A 第一法)比較,均制砂機生產(chǎn)線不得更深。
水分 輸送帶取本品,照水分測定法(中國藥典2000年版二部附錄Ⅷ M第一法A)測定,含水分不得過1.5%。
有關物質(zhì)取本品適量,加流動相制成每1ml中含0.5mg的溶液作為供試品溶液,精密量取適量,加流動相稀釋成管鏈式粉體輸送機每1ml中含5μg的溶液作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件測定。量取對照溶液10μl,注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測器靈敏度,使主成分拖尾峰(tailingpeak)。前者少見。>液相輸送帶色譜色譜峰的峰高約為滿量程的20%,再準確量取上述兩種溶液各10ml,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰,單個雜質(zhì)峰的基線構成之面積稱峰面積。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h>峰面積不得大于對照溶液主成分峰的峰面積(1.0%),各雜質(zhì)峰峰面積總和(小于對照溶液主成分峰峰面積1/10的雜質(zhì)峰不計)不得大于對照溶液石料破碎主成分峰峰面積的2.5倍(2.5%)。
二氯甲烷 照氯相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V E) 測定,
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷基共聚物為固定相的毛細管色譜柱(30m×0.53mm,涂層厚3.0μm),柱溫為30℃(每次進樣測定后,柱溫升至100℃維持8分鐘)。稱取二氯甲烷、丙酮和乙醇各適量,加水制成每1ml中各含0.4mg的溶液,作為分離度溶液,量取1μl,注入氣相色譜儀。二氯甲烷峰與乙醇峰、丙醇峰的分離度均應符合規(guī)定。
取二氯甲烷適量,精密稱定,加水定量稀釋制成每1ml中含40m g的溶液,作為對照溶液;另取本品約0.1g,精密稱定,精密加水2ml,振搖使溶解,作為供試品溶液。精密量取上述兩種溶液各1μl,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如顯與二氯甲烷對照溶液相應的色譜峰,按內(nèi)標法以峰面積計算,含二氯甲烷的量不得過0.06%。
細菌內(nèi)毒素 取本品,依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄Ⅺ E),每1mg頭孢硫脒中含內(nèi)毒素的量應小于0.075EU。
無菌 取本品,分別加入100ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中使溶解,用薄膜過濾法處理后,依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄ⅪH),應符合規(guī)定。
【含量測定】 照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄Ⅴ D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以磷酸鹽緩沖液(取無水磷酸氫二鈉2.76g,枸櫞酸1.29g,加水溶解并稀釋成1000ml)-乙腈(80:20)為流動相;檢測波
長為254nm。理論板數(shù)按頭孢硫脒峰計算應不低于3000;取頭孢硫脒對照品適量,加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋成每1ml中含頭孢硫脒2mg的溶液,置80℃水浴中加熱10分鐘,放冷,濾過,取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀,頭孢硫脒峰與其降解產(chǎn)物峰的分離度應符合規(guī)定。
測定法 取本品適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含頭孢硫脒0.1mg的溶液,取10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取頭孢硫脒對照品適量,同法測定。按外標法以峰面積計算供試品中C19H28N4O6S2的含量。
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